CRISPR/Cas13a具有RNA引導的RNA切割能力,RNA引導反式核酸内切酶活性是高度特異的,高效切割ssRNA,每個激活Cas13a蛋白(bái)可以識别104 拷貝RNA。CRISPR/Cas13a強大(dà)信号放(fàng)大(dà)能力使RNA檢測靈敏度能夠降低到飛摩爾(10-15M)水平。
1、CLISA檢測原理
CLISA(CRISPR/Cas signal amplification Linked ImmunoSorbent Assay)是CRISPR-based單分(fēn)子免疫診斷技術平台,靈敏度達fM或fg/mL,高于ELISA 1,000倍,精準分(fēn)析多種疾病的超低濃度生(shēng)物(wù)标志(zhì)物(wù)。
結合“三明治結構”免疫結合機制,用含有T7啓動子序列生(shēng)物(wù)素化雙鏈DNA(dsDNA)取代酶放(fàng)大(dà)體(tǐ)系。T7聚合酶識别啓動子序列進行轉錄,産生(shēng)大(dà)量單鏈RNA分(fēn)子拷貝。crRNA識别轉錄RNA分(fēn)子導緻CRISPR/Cas13反式切割活性激活。兩端熒光團和猝滅基團标記的短ssRNA報告探針通過反式切割活性被切割。
相較ELISA免疫檢測方法,CLISA利用T7轉錄放(fàng)大(dà)分(fēn)子數,CRISPR剪切放(fàng)大(dà)信号,靈敏度提升1,000倍,檢測限達fg/mL。
2、主要試劑組分(fēn)
3、試劑盒檢測性能
反應時間:3小(xiǎo)時 (免疫反應0.5小(xiǎo)時,轉錄反應1小(xiǎo)時,Cas熒光信号檢測0.5小(xiǎo)時。)
線性範圍:50fg/mL~5ng/mL
最低檢測限:10fg/mL
4. 開(kāi)發産品線
CLISA主要用于開(kāi)發fmol或fg/mL濃度的蛋白(bái)标志(zhì)物(wù)臨床診斷産品。